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A análise da reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica de laboratório. O objetivo do teste de PCR é encontrar pequenas quantidades de DNA em uma amostra, usando um processo conhecido como amplificação. Durante a amplificação por PCR, o DNA de interesse é copiado repetidamente até que haja o suficiente para análise e detecção. Por exemplo, a PCR pode ser usada para identificar pequenas quantidades de DNA de organismos que causam gonorréia ou clamídia que estão presentes em uma amostra de urina.Como funciona o PCR?
A primeira etapa do PCR é criar primers. Essas são sequências curtas de DNA que correspondem às extremidades da amostra de DNA que você está tentando detectar. Eles são o truque para encontrar, amplificar e detectar um pedaço específico de DNA. Esse pedaço de DNA pode ser usado para identificar um patógeno. Também pode ser usado para fazer coisas como detectar genes para resistência a antibióticos.
Depois de ter seus primers, a próxima etapa na PCR é aquecer a amostra de modo que o DNA de fita dupla se separe em duas fitas simples - isso é chamado desnaturação. Então os primerssão combinados com a amostra de DNA. Depois disso, um DNA polimerase é usado para iniciar a replicação do DNA no local do primer. Finalmente, o DNA é aquecido para separar as fitas mais uma vez. Com isso, todo o processo de PCR começa novamente.
A quantidade do segmento de DNA de interesse presente na amostra aumenta exponencialmente a cada ciclo de PCR. No primeiro ciclo, uma cópia se torna duas. Então, duas cópias se tornam quatro, depois se tornam oito, etc. Esse crescimento exponencial significa que, geralmente, apenas 20 a 40 ciclos são necessários para determinar se o DNA em questão está presente. (Se o DNA estiver presente, 20-40 ciclos também são suficientes para fornecer uma amostra suficiente para análise).
Todas as etapas de uma reação em cadeia da polimerase - desnaturação do DNA, aplicação dos primers e alongamento do DNA - acontecem em diferentes temperaturas. Isso significa que, após a mistura inicial ser montada, as etapas podem ser controladas por meio de um processo conhecido como termociclagem. A termociclagem significa que a temperatura é mantida nos níveis necessários apenas pelo tempo suficiente para cada etapa ocorrer. Assim, a PCR é uma forma eficiente de amplificar a quantidade de DNA alvo. Na verdade, pode ser realizado em um único tubo de ensaio com pouca necessidade de intervenção humana.
A reação em cadeia da polimerase representou uma revolução na técnica biológica quando foi desenvolvida pela primeira vez no início dos anos 1980. A criadora do PCR, Kary Mullis, ganhou o Prêmio Nobel de Química por seu trabalho em 1993.
Por que PCR é relevante para o teste de DST
Reação em cadeia da polimerase e técnicas relacionadas, como reação em cadeia da ligase, estão se mostrando cada vez mais importantes para o teste de DST, porque essas técnicas podem identificar diretamente pequenas quantidades de DNA ou RNA viral nas amostras. Identificar o código genético de um patógeno não exige que o patógeno esteja vivo, ao contrário da cultura bacteriana ou viral. Também não requer que a infecção tenha ocorrido há muito tempo para que as pessoas tenham desenvolvido uma reação detectável de anticorpos (a forma como as infecções são detectadas por ELISA). Isso significa que as técnicas de PCR às vezes podem detectar doenças mais cedo do que outros testes. Melhor ainda, as doenças sexualmente transmissíveis podem ser detectadas sem muita necessidade de se preocupar em manter as amostras vivas ou em testá-las exatamente no momento certo.
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