Contente
- O que é um genótipo e um fenótipo?
- Explicando a genotipagem do HIV
- Explicando a fenotipagem do HIV
- Quando é feito um teste de resistência genética?
Quando ocorre falha do tratamento, combinações alternativas de medicamentos devem ser selecionadas para suprimir essa nova população de vírus resistentes. Teste de resistência genética ajuda a facilitar isso, identificando os tipos de mutações resistentes no "pool viral" de uma pessoa, ao mesmo tempo que verifica o quão suscetíveis esses vírus são a possíveis agentes anti-retrovirais.
Duas ferramentas principais são usadas para testes de resistência genética em HIV: o Ensaio genotípico de HIV e a Ensaio fenotípico de HIV.
O que é um genótipo e um fenótipo?
Por definição, um genótipo é simplesmente a composição genética de um organismo, enquanto um fenótipo são as características ou traços observáveis desse organismo.
Os ensaios genotípicos (ou genotipagem) funcionam identificando as instruções herdadas dentro do código genético de uma célula, ou DNA. Os ensaios fenotípicos (ou fenotipagem) confirmam a expressão dessas instruções sob a influência de diferentes condições ambientais.
Embora a associação entre genótipo e fenótipo não seja absoluta, a genotipagem pode muitas vezes ser preditiva do fenótipo, particularmente quando mudanças no código genético conferem mudanças esperadas em traços ou características - como no caso de desenvolvimento de resistência a drogas.
A fenotipagem, por outro lado, confirma o "aqui e agora". Tem como objetivo avaliar a reação de um organismo a mudanças específicas na pressão ambiental, como quando o HIV é exposto a diferentes medicamentos e / ou concentrações de drogas.
Explicando a genotipagem do HIV
A genotipagem do HIV é geralmente a tecnologia mais comum usada para testes de resistência. O objetivo do ensaio é detectar mutações genéticas específicas no gag-pol região do vírus ' genoma (ou código genético). Esta é a região onde as enzimas transcriptase reversa, protease e integrase - os alvos da maioria dos medicamentos anti-retrovirais - são codificadas na cadeia de DNA.
Ao primeiro amplificar o genoma do HIV usando a tecnologia de reação em cadeia da polimerase (PCR), os técnicos de laboratório podem sequenciar (ou "mapear") a genética do vírus usando várias tecnologias de detecção de mutação.
Essas mutações (ou acúmulo de mutações) são interpretadas por técnicos que analisam a relação entre as mutações identificadas e a suscetibilidade esperada do vírus aos diferentes antirretrovirais. Os bancos de dados online podem ajudar comparando a sequência de teste com a de um vírus de "tipo selvagem" protótipo (isto é, HIV que não contém mutações resistentes).
A interpretação desses testes é usada para determinar a suscetibilidade aos medicamentos, com o maior número de mutações chave conferindo a níveis mais elevados de resistência aos medicamentos.
Explicando a fenotipagem do HIV
A fenotipagem do HIV avalia o crescimento do HIV de uma pessoa na presença de uma droga e, em seguida, compara isso ao crescimento de um vírus de tipo selvagem de controle na mesma droga.
Tal como acontece com os ensaios genotípicos, os testes fenotípicos amplificam a região gag-pol do genoma do HIV. Esta seção do código genético é então "enxertada" em um clone de tipo selvagem usando tecnologia de DNA recombinante. O vírus recombinante resultante é usado para infectar células de mamíferos in vitro (no laboratório).
A amostra viral é então exposta a concentrações crescentes de diferentes drogas anti-retrovirais até que a supressão viral de 50% e 90% seja alcançada. As concentrações são então comparadas com os resultados da amostra de tipo selvagem de controle.
As alterações de "dobra" relativas fornecem a faixa de valores pela qual a susceptibilidade ao medicamento é determinada. Uma mudança de quatro vezes significa simplesmente que quatro vezes a quantidade de droga foi necessária para atingir a supressão viral em comparação com o tipo selvagem. Quanto maior o valor de dobra, menos suscetível o vírus é a um medicamento específico.
Esses valores são então colocados dentro das faixas clínicas inferiores e clínicas superiores, com os valores superiores conferindo níveis mais elevados de resistência aos medicamentos.
Quando é feito um teste de resistência genética?
Nos EUA, o teste de resistência genética é tradicionalmente realizado em pacientes sem tratamento prévio para determinar se eles têm qualquer resistência "adquirida" aos medicamentos. Estudos nos EUA sugerem que entre 6% e 16% dos vírus transmitidos serão resistentes a pelo menos um medicamento anti-retroviral, enquanto quase 5% serão resistentes a mais de uma classe de medicamento.
O teste de resistência genética também é usado quando há suspeita de resistência aos medicamentos em indivíduos em terapia. O teste é realizado enquanto o paciente está tomando o regime em falha ou dentro de quatro semanas da interrupção do tratamento se a carga viral for maior que 500 cópias / mL. Os testes genotípicos são geralmente preferidos nesses casos, pois custam menos, têm um tempo de resposta mais rápido e oferecem maior sensibilidade para detectar misturas de vírus resistentes e de tipo selvagem.
Uma combinação de testes fenotípicos e genotípicos é geralmente preferida para pessoas com resistência complexa a múltiplos medicamentos, particularmente para aqueles expostos a inibidores de protease.